什么原因导致电泳涂片?



您是否想知道科学家如何研究像您的DNA这样的微小片段?一种方法是凝胶电泳。电泳通常会产生清晰易读的条带,非常适合科学解释,但涂片结果有时会掩盖数据。

TL; DR(太长;未读)

凝胶电泳使科学家能够可视化消化的样品并测量片段的大小。涂抹不当是由于琼脂糖凝胶制备不当,未稀释样品装入孔中或使用劣质样品造成的。

什么是电泳?

凝胶电泳是科学家可视化小分子(例如DNA)的消化样品并估算这些片段大小的一种方法。为了进行电泳,科学家通过将琼脂糖悬浮在沸水中来制备凝胶。所得的聚合反应产生了纵横交错的糖聚合物,因此该凝胶在化学层面上看起来有点像蜘蛛网。

科学家使用切割仪器在凝胶中形成孔,这样他们就可以将非常少量的消化样品加载到孔中。开启机器会使电能流过凝胶,并且样品中的碎片开始从孔中行进到凝胶的另一侧。由于凝胶是网状的,较小的碎片会快速穿过基质,而较大的碎片则需要更长的时间才能穿过基质。完成后,凝胶中的黑带代表不同片段的传播距离。科学家测量这些条带,并使用对数计算,根据其迁移的距离确定每个碎片的大小。

科学家希望有清晰的条带,但有时条带会涂片。这种涂抹通常是由于凝胶制备不良,未稀释的样品上样至孔中或质量较差的样品所致。

凝胶准备不理想

当涉及涂抹结果时,一个可能的罪魁祸**是准备不充分的凝胶。令人满意的凝胶均匀聚合,在流延盘中的整个凝胶中产生均匀的基质。如果一部分凝胶(通常是下半部分)在科学家完成整个托盘倾倒之前凝固,则生成的凝胶将不均匀并产生涂抹的结果。

样本过多

在将样品加载到孔中之前,**将这些样品稀释到足以通过凝胶的程度,而不会溢出孔。如果由于科学家忘记稀释样品或使用了不适当的稀释因子而使样品浓度过高,那么碎片对于孔来说将太大而产生污点。

劣质样品

不良的样品质量也会造成拖尾现象。例如,被蛋白质污染或含盐过多的DNA样品可能会产生拖影。降解或变性的样品也会产生较差的结果,包括条带弄脏。

凝胶电泳是科学家观察消化后的样品并确定片段大小的**佳方法。精心准备凝胶和样品,可**大程度地减少涂抹的可能性,并产生清晰的条带,是科学解释的理想之选。


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