示踪染料在凝胶电泳中起什么作用?



凝胶电泳是一种常用的实验室技术,具有许多实际应用,包括DNA指纹图谱和基因组测序。该过程涉及使用电流分离DNA片段,同时跟踪通过过滤凝胶的分子运动速率。

在无色DNA样品中添加蓝色或橙色跟踪染料,可以查看样品并获得有关DNA分子在电泳过程中如何运动的信息。鉴定是基于分子迁移后凝胶上DNA条带的大小。

凝胶电泳的工作原理

凝胶电泳使用电流将DNA片段拉过凝胶,以通过大小和电荷分离和鉴定DNA分子。这种凝胶通常由琼脂糖粉制成,琼脂糖粉是从海藻中提取的多糖。

将琼脂糖添加到水和盐的缓冲溶液中,并将混合物加热和冷却以制成多孔凝胶,该凝胶将在电泳过程中充当过滤基质。然后将凝胶置于电泳仪中,并用导电的缓冲溶液覆盖。

将含有DNA和负载染料的溶液吸移到凝胶中**在凝胶制备过程中制备的小孔中。染料可 帮助您 清楚地看到要添加到电泳单元负极附近的凝胶孔中的样品。

正电极位于另一端。将已知的DNA片段标准品放置在**个孔中,该孔将创建一条DNA条带,用于比较和鉴定。

DNA分子的磷酸骨架使DNA带负电荷。因此,相反的分子会吸引,因此,DNA分子会被吸引到正极,并在通电时开始移动或“迁移”。

较小的DNA片段比较大的片督鹕9159糖果派对贫酶欤蛭窃谕ü旱亩嗫谆是ㄒ剖庇龅降淖枇闲 4笮∠嗨频腄NA片段在凝胶中形成DNA条带。

加载染料的目的和重要性

DNA是无色的,因此在样品中添加跟踪染料有助于您确定电泳过程中凝胶中不同大小的蛋白质分子的移动速率。与DNA样品一起移动的加载染料的例子包括溴酚 蓝和二甲苯基氰醇。

选择的染料不应具有反应性或改变DNA。溴酚蓝是一种染料,用于追踪包含约400个碱基对的较小尺寸的DNA链,而二甲苯基氰醇更适合于具有多达8000个碱基对的较大的DNA链。选择的染料不应具有反应性或改变DNA。

甘油在琼脂糖凝胶电泳中的作用

在准备进行电泳的DNA样品时,您将需要添加甘油和水以及加载染料。甘油是一种浓稠的糖浆物质,在将DNA样品插入凝胶板一端的孔中之前,会赋予DNA样品更高的密度。

如果没有甘油,DNA样品就会分散,而不是像在形成DNA阶梯时那样沉入井中并形成一层。

SDS PAGE中的跟踪染料

十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS PAGE)是一种适合分离蛋白质和氨基酸的技术,蛋白质和氨基酸比线性DNA分子更小且更复杂。使用聚丙烯酰胺(SDS PAGE凝胶)代替琼脂糖凝胶进行电泳。

溴酚蓝(BPB)作为跟踪染料添加到样品缓冲液中,该跟踪染料沿分离蛋白质的相同方向移动并划分其前缘。

DNA结合染料的作用

可以将DNA结合染料(例如橙色溴化乙锭)添加到凝胶或电泳缓冲液中。顾名思义,染料附着在DNA分子上。

 

处理这种诱变染料时**格外小心,因为它可以结合皮肤细胞中的DNA。与跟踪染料不同,溴化乙锭在紫外光下发出明亮的荧光,使DNA条带可见。


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